PCR新手指南:PCR儀的三種控溫模式
在進行PCR儀中控溫模式設定時,一般有三個選項:Block、Tube及Probe。下面就這三種模式種簡單的介紹:
PCR儀的溫度傳感器一般是在模塊下面的,也就是說儀器實際能夠控制的是模塊的溫度,Block模式指的就是儀器以控制Block的溫度為目的,也就是說你輸入95度5分鐘,則模塊的溫度達到95度后開始計時,5分鐘后完成。這是zui基本的控溫模式。
但是,實際上我們輸入95度5分鐘是希望PCR管內(nèi)的溫度達到95后開始計時5分鐘。PCR儀器開發(fā)人員可以先將模塊溫度控制到97度(比如而已,如果不超過95度,管內(nèi)溫度可以很長時間才能達到95度或根本達不到),過幾秒鐘后,等到管內(nèi)溫度達到95度,再將模塊溫度降到95度。這樣做既達到了管內(nèi)溫度到95度,且速度較快。但過沖的溫度量與時間及PCR管的導熱系數(shù)、PCR反應液的體積都有關系。這就是各個PCR儀廠家的核心技術了。這種控溫方式就稱為Tube模式。
如果直接將一個溫度傳感器加入PCR管中,直接測量PCR管內(nèi)的溫度不是也可以嗎?這就是Probe模式,也就是在一個不進行PCR反應的管內(nèi)放入一個溫度探頭,儀器根據(jù)溫度探頭測到的溫度來控制PCR管內(nèi)的溫度。但傳感器的數(shù)據(jù)檢測、分析及反饋是需要時間的,這種控制模式不一定比Tube模式好,而且如果反應體積發(fā)生變化時,就比較麻煩了。
因此,如今的PCR儀就都是Block和Tube兩種模式了。如果是正常的PCR反應,一般選Tube模式。如果是長時間保溫且對溫度過沖要求很高,則可以考慮用Block模式。
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